Cum se determină concentrația optimă?
Pentru inductorul IPTG (izopropil-beta-d-tiogalactozid), cu cât concentrația este mai mare, cu atât mai bine.Concentrația optimă depinde de condițiile experimentale specifice și de efectul de inducție dorit.
În general, concentrația de IPTG este utilizată în intervalul 0,1-1 mM.Concentrațiile mai mici pot reduce efectele adverse asupra creșterii celulelor și pot reduce citotoxicitatea din cauza supraexprimării proteinelor țintă.Concentrațiile mai mari pot provoca o sarcină metabolică excesivă a celulelor, afectând creșterea celulelor și eficiența expresiei.
Modul de determinare a concentrației optime poate fi evaluarea nivelului de expresie al proteinei țintă prin efectuarea de teste de inducție IPTG la diferite concentrații.Testele de cultură la scară mică pot fi efectuate utilizând o gamă de concentrații IPTG (de exemplu 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM etc.), iar efectul expresiei la diferite concentrații poate fi evaluat prin detectarea nivelului de expresie al proteinei țintă (de exemplu Western detecție pe blot sau fluorescență).Conform rezultatelor experimentale, concentrația cu cel mai bun efect de expresie a fost selectată ca concentrație optimă.
În plus, puteți consulta, de asemenea, literatura relevantă sau experiența altor laboratoare pentru a înțelege intervalul de concentrație de IPTG utilizat în mod obișnuit în condiții experimentale similare, apoi optimizați și ajustați în funcție de nevoile experimentale.
Este important de reținut că concentrația optimă poate varia în funcție de diferite sisteme de expresie, proteine țintă și condiții experimentale, așa că cel mai bine este să optimizați de la caz la caz.
Ora postării: 28-sept-2023