4-nitrofenil beta-D-galactopiranozidă CAS:200422-18-0

Efect: ONPG este un substrat utilizat în mod specific pentru a detecta prezența și activitatea enzimei β-galactozidazei.Când enzima β-galactozidază este prezentă și activă, scindează ONPG în doi produși: o-nitrofenol și un derivat de galactoză.Eliberarea de o-nitrofenol are ca rezultat o schimbare a culorii galbene, care poate fi măsurată cu ajutorul unui spectrofotometru.

Aplicație: ONPG are mai multe aplicații în cercetarea în biologie moleculară și biochimie:

Determinarea activității β-galactozidazei: ONPG este utilizat în mod obișnuit pentru a măsura și cuantifica activitatea enzimei β-galactozidazei.Viteza de formare a o-nitrofenolului, care este direct proporțională cu activitatea enzimatică, poate fi măsurată spectrofotometric.

Expresia și reglarea genelor: ONPG este adesea utilizat în experimente legate de expresia genelor și studiile de reglare.Este frecvent utilizat în testele proteinelor de fuziune, cum ar fi sistemul de fuziune lacZ utilizat în mod obișnuit, pentru a studia expresia genelor sub controlul unor promotori specifici.Activitatea beta-galactozidazei măsurată folosind ONPG oferă perspective asupra nivelului de expresie a genelor.

Screening pentru activitatea β-galactozidazei: ONPG poate fi utilizat ca metodă de screening colorimetrică în tehnologia ADN recombinant pentru a identifica prezența și funcționalitatea genei LacZ, care codifică β-galactozidaza.Această metodă de screening ajută la identificarea clonelor care conțin gena de interes.

Studii de cinetică enzimatică: ONPG este, de asemenea, util în studierea cineticii enzimei β-galactozidazei.Prin măsurarea vitezei de reacție enzimă-substrat la diferite concentrații de substrat, este posibil să se determine parametri cinetici, cum ar fi constantele Michaelis-Menten (Km) și vitezele maxime de reacție (Vmax).