4-Nitrofenil beta-D-galactopiranozidă CAS:200422-18-0

Efect: ONPG este un substrat utilizat special pentru a detecta prezența și activitatea enzimei β-galactozidază. Atunci când enzima β-galactozidază este prezentă și activă, aceasta scindează ONPG în două produse: o-nitrofenol și un derivat de galactoză. Eliberarea o-nitrofenolului are ca rezultat o schimbare de culoare galbenă, care poate fi măsurată cu un spectrofotometru.

Aplicație: ONPG are mai multe aplicații în cercetarea în biologie moleculară și biochimie:

Determinarea activității β-galactozidazei: ONPG este utilizat în mod obișnuit pentru măsurarea și cuantificarea activității enzimei β-galactozidaze. Rata de formare a o-nitrofenolului, care este direct proporțională cu activitatea enzimatică, poate fi măsurată spectrofotometric.

Expresia și reglarea genelor: ONPG este adesea utilizat în experimente legate de studiile de expresie și reglare a genelor. Este frecvent utilizat în testele de proteine ​​de fuziune, cum ar fi sistemul de fuziune lacZ utilizat în mod obișnuit, pentru a studia expresia genelor sub controlul unor promotori specifici. Activitatea beta-galactozidazei măsurată folosind ONPG oferă informații despre nivelul de expresie genică.

Screening-ul pentru activitatea β-galactozidazei: ONPG poate fi utilizat ca metodă de screening colorimetric în tehnologia ADN-ului recombinant pentru a identifica prezența și funcționalitatea genei LacZ, care codifică β-galactozidaza. Această metodă de screening ajută la identificarea clonelor care conțin gena de interes.

Studii de cinetică enzimatică: ONPG este, de asemenea, util în studierea cineticii enzimei β-galactozidază. Prin măsurarea vitezei de reacție enzimă-substrat la diferite concentrații de substrat, este posibil să se determine parametri cinetici precum constantele Michaelis-Menten (Km) și vitezele maxime de reacție (Vmax).